东北梅花鹿Galectin-1基因RNAi载体的构建

摘要

构建东北梅花鹿galectin-1基因特异小分子干扰RNA(shRNAs)真核干扰载体,并获得稳定感染生茸区骨膜细胞系.设计2对galectin-1 mRNA特异性shRNAs,两端分别带有Cla Ⅰ/Mlu Ⅰ酶切位点和一个9 nt发夹结构,通过基因克隆技术将其插入真核表达质粒pLVTHM中,构建galectin-1 shRNA表达载体,利用PCR和测序筛选出阳性质粒.将重组质粒与PPAX及pMD2.G共转染到293t细胞中,在倒置显微镜下观察转染效果并收集、浓缩病毒质粒,感染生茸区骨膜细胞.结果表明,成功构建东北梅花鹿alectin-1基因RNAi载体,获得稳定传代被感染生茸区骨膜细胞系,为进一步研究g alectin-1基因在鹿茸再生中的作用奠定基础.