Rho/ROCK抑制剂Y27632对小鼠腔前卵泡体外培养的影响

摘要

目的 探讨Rho/ROCK信号通路抑制剂Y27632对小鼠卵泡体外发育的影响.方法 取出生后12.5d的小鼠卵巢,采用机械法收集单个腔前卵泡,用微滴培养法对其进行培养.设置对照组和含有Y27632的处理组,培养期间观察卵泡和卵母细胞生长状态,同时,测量对照组和处理组的卵泡直径和卵母细胞直径,用荧光定量PCR技术检测颗粒细胞、卵母细胞以及凋亡相关基因的表达情况,同时用细胞荧光染色技术监测卵泡中颗粒细胞的凋亡情况.结果 通过形态学观察,培养基中添加Y27632后,整个卵泡生长过程中,卵泡的增长直径为(25.90±3.69)μm和卵母细胞增长直径为(4.37±1.89)μm,与对照组相比差异均无统计学意义(P均>0.05).经荧光定量PCR技术检测发现,随着卵泡的不断发育,颗粒细胞表达相关基因Amh、Lhr、Fshr和Foxl2,与对照组相比有差异,而卵母细胞特异性基因Bmp15则无变化.卵母细胞成熟后经微管染色发现,Y27632的添加并不影响卵母细胞完成第一次减数分裂.通过卵泡活力检测的结果 得知,处理组的颗粒细胞凋亡现象少于对照组,凋亡基因Bad低于对照组,且能引起凋亡抑制基因Xiap的上调.结论 小鼠卵泡经微滴法培养后,添加Y27632能提高颗粒细胞的基因Amh、Lhr、Fshr和Foxl2的表达.同时可降低颗粒细胞的凋亡,从而维持卵泡的正常发育.