热休克蛋白60基因定点诱变导致其在细胞内定位的改变

摘要

目的 研究将热休克蛋白60(HSP60)蛋白序列中第70位的丝氨酸(serine)突变为丙氨酸(alanine)后,HSP60在细胞内定位的改变.方法 将PrC/CMV - HSP60P1重组质粒中HSP60P1编码第70位丝氨酸的碱基定点诱变为编码丙氨酸的碱基序列,转染至小胶质细胞BV -2细胞株中表达.细胞经10h缺氧处理后,裂解细胞,应用差速离心方法 分离细胞膜、细胞质和线粒体,应用Western- blot方法 检测各细胞器中HSP60的含量.结果 在转染未诱变PrC/CMV - HSP60P1质粒的细胞中,正常情况下,HSP60大部分分布在线粒体,少部分在胞浆,细胞膜中未见表达；缺氧刺激后,HSP60在细胞膜、胞浆和线粒体中均有表达；然而70位丝氨酸突变为丙氨酸后,只观察到HSP60在胞浆和线粒体中的表达,而在细胞膜上未见表达.结论 作为磷酸化位点的Serine70对HSP60在细胞内的定位具有关键作用.