细粒棘球蚴抗原Eg-01042的筛选、表达、纯化及免疫原性的初步研究

摘要

目的 研究细粒棘球蚴中的原头蚴特异性抗原Eg-01042的表达、纯化及免疫原性.方法 ①分析已经公开发表的细粒棘球绦虫转录组(mRNA)测序数据,筛选六钩蚴中不表达、只在原头蚴中高表达的抗原分子Eg-01042;②人工合成获得目的基因片段,经亚克隆、诱导表达、亲和层析法纯化重组蛋白rEg-01042,并对重组蛋白进行鉴定;③BALB/c小鼠随机分为3组:rEg-01042+佐剂免疫组、PBS+佐剂对照组和空白对照组,每组21只,分别于背部皮下注射10μg rEg-01042+ PBS+佐剂、PBS+佐剂(均为100μL/只),空白对照组不处理,2周后加强免疫(均为100μl/只).分别于免疫前、首次免疫后的1、2、3、4、5、6周取眼球采血,ELISA检测各时间点3组血清的rEg-01042特异性IgG水平及细胞因子IFN-γ及IL-4水平;④利用原头蚴感染小鼠血清、rEg-01042免疫小鼠血清和小鼠空白对照组血清经Western blot分析重组蛋白的免疫原性.结果 ①成功筛选出原头蚴中高表达的抗原分子Eg-01042.;②成功表达、纯化出重组蛋白rEg-01042(为包涵体蛋白);③ELISA检测结果显示,自首次rEg-01042免疫后第2、3、4、5、6周重组蛋白rEg-01042产生的特异性IgG均高于PBS+佐剂组和空白对照组(P＜0.01).首次免疫后5周,IFN-γ及血清IL-4水平高于PBS+佐剂组和空白对照组(P＜0.01).④Western blot结果显示,原头蚴感染小鼠血清和rEg-01042+佐剂免疫组血清均能识别重组蛋白rEg-01042.结论 获得细粒棘球蚴差异表达抗原Eg-01042并证实重组蛋白rEg-01042具有较好的免疫原性.