外泌体通过促进神经轴突再生治疗神经损伤性疾病

摘要

目的 探索骨髓间充质干细胞外泌体对神经轴突再生的影响规律.方法 提取SD大鼠骨髓间充质干细胞并通过细胞形态及流式细胞学进行鉴定,利用超速离心法提取细胞上清液中的外泌体并通过透射电镜、粒径及蛋白免疫印迹法进行鉴定.培养肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞及提取SD大鼠原代神经干细胞.将PC12细胞分为空白对照组、30μg外泌体组及60μg外泌体组.通过荧光标记大鼠外泌体观察靶细胞吞噬情况.采用免疫荧光染色检测PC12细胞及神经干细胞轴突生长情况,通过蛋白免疫印迹法检测细胞神经丝蛋白(NF-200)和生长相关蛋白(GAP-43)的表达水平.结果 细胞形态及流式细胞学证实成功提取出大鼠骨髓间充质干细胞,透射电镜、粒径及蛋白免疫印迹法检查证实成功提取出骨髓间充质干细胞外泌体,外泌体可以被神经细胞摄取促进PC12细胞及神经干细胞轴突生长及轴突蛋白表达,并且这一促进作用随着外泌体量的增加而增强,3组PC12细胞及神经干细胞轴突长度及轴突蛋白表达比较差异均有统计学意义(P均<0.001).结论 骨髓间充质干细胞外泌体可通过促进神经轴突再生进而发挥神经损伤修复作用.