人白细胞介素12的cDNA克隆及双顺反子腺病毒载体的构建

摘要

目的:克隆中国人IL-12的p40和p35亚基cDNA,构建含hIL-12双顺反子的腺病毒载体.方法:采用RT-PCR从上海地区人骨髓有核细胞中克隆IL-12的双亚基cDNA,并插入质粒pCI中进行全基因序列分析.利用质粒p△ElsplA和IRES序列构建同时表达p35和p40亚基的腺病毒载体.酶切鉴定构建物中基因插入的正确性.结果:上海地区人骨髓有核细胞中IL-12的p40和p35 cDNA基因同已报道的北京地区人DC细胞中IL-12的p40和国外报道的NKSF,CLMF的p40和p35序列各有异同,构建的IL-12双亚基同时表达的腺病毒载体酶切鉴定正确.结论:人IL-12的p40和p35基因可能存在多态性,同时表达IL-12双亚基的腺病毒载体构建成功,对开展人IL-12基因治疗肿瘤具有重要意义.