抗人红细胞单链抗体基因的构建及表达

摘要

从分泌抗人红细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞 3F5中提取总 RNA,逆转录成 c DNA,用合成的寡核苷酸引物通过 PCR扩增和克隆单抗的轻、重链可变区基因 ,用双脱氧核苷酸链终止法分析核苷酸序列 ,采用 PCR拼接法构建单链抗体基因 ,并插入原核表达载体 PEt- 2 8a,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,经 IPTG诱导后表达 .序列分析表明所克隆的 VL、VH分别属于鼠 Ig Kappa轻链 IV亚组和 Ig重链 亚组 .VH、VL基因均含正确的框架结构 ,构建的单链抗体基因全长 750 bp,在原核系统中的表达产物经 SDS- PAGE分析相对分子量约为 2 80 0 0 .