草菇cDNA削减文库的构建

摘要

介绍一种改进的利用差异杂交和定向插入构建全长cDNA削减文库的方法.分别以诱导和非诱导条件培养草菇菌丝,两者都提取总RNA并采用PolyATtract mRNA Isolation System III试剂盒快速提取mRNA,由PowerScriptTM Reverse Transcriptase将诱导菌丝提取的mRNA进一步逆转录成cDNA第一链,用得到的cDNA第一链和非诱导菌丝提取的mRNA进行杂交,将未杂交上的cDNA第一链洗脱浓缩后,用SMARTTM cDNA Library Construction 试剂盒构建成草菇cDNA削减文库.经检测:原始文库滴度为2.5×105 pfu/mL,重组率为93%,插入cDNA大小在0.5～4.0 kb之间,文库扩增后,文库滴度为1.1×109 pfu/mL,并从中克隆到了若干植物纤维降解酶.结果表明其简化了实验步骤,而且更有利于富集所需全长基因,是构建cDNA文库的一种有效改进.