pEGFP-N1-heNOS重组质粒的构建与鉴定

摘要

目的:构建pEGFP-N1-heNOS真核表达重组质粒.方法:应用基因重组手段,根据人内皮型一氧化氮合酶(human endothelial nitric oxide synthase,heNOS)基因序列和表达载体pEGFP-N1质粒上的多克隆位点设计了1对引物,对含有heNOS基因的质粒pBluescript Ⅱ SK-heNOS进行了PCR扩增,得到了约3.6 kbp的目的片段.将其插入到载体启动子下游,与增强型绿色荧光蛋白(enhanced greenfluorescent protein,EGFP)报告基因融合,重组质粒经菌液PCR、限制性内切酶酶切和测序进行鉴定.结果:用PCR方法成功从质粒pBluescript Ⅱ SK-heNOS中扩增出heNOS基因片段,经菌液PCR、酶切及测序鉴定,heNOS基因成功插入到载体pEGFP-N1质粒中,插入目的基因的真核表达载体的酶切图谱与预期一致,并且heNOS基因与Genbank所提供的序列完全一致.结论:成功构建了pEGFP-N1-heNOS真核表达重组质粒.