miR-192-5p通过靶向Notch3减轻顺铂所致的肾小管上皮细胞凋亡

摘要

目的:探讨Notch3在顺铂诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)损伤中的表达变化及其潜在的相关上游微小RNA(microRNA,miRNA)调控机制。方法:体外培养HK-2细胞,Western blot及实时定量PCR检测Notch3在顺铂(20μmol/L,24 h)诱导HK-2细胞凋亡模型及正常细胞中的表达;Targetscan预测靶向Notch3的miRNA,实时定量PCR测定相关miRNA在顺铂诱导HK-2细胞凋亡模型及正常细胞中的表达;然后,将HK-2细胞分别转染阴性对照模拟物(NC mimic)及miR-192-5p模拟物(miR-192-5p mimic),并依据给予或不给予顺铂处理(20μmol/L,24 h),分为NC mimic组、NC mimic+Cisplatin组、miR-192-5p mimic组、miR-192-5p mimic+Cisplatin组。Western blot及实时定量PCR检测Notch3的表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡率,研究miR-192-5p对顺铂所致肾小管上皮细胞凋亡及Notch3表达的影响;荧光素酶报告实验证实miR-192-5p与靶基因Notch3的靶向关系。结果:Notch3在顺铂诱导肾小管上皮细胞凋亡中的表达上调,同时miR-192-5p在顺铂诱导肾小管上皮细胞凋亡中的表达下调;实时定量PCR证实转染miR-192-5p模拟物后,miR-192-5p的表达量升高;过表达miR-192-5p能够减轻顺铂诱导的肾小管上皮细胞凋亡,同时负向调控Notch3的表达;荧光素酶报告实验结果表明miR-192-5p直接靶向作用于Notch3的3′-UTR,抑制Notch3的表达,证实Notch3是miR-192-5p的直接靶标。结论:miR-192-5p可通过直接抑制Notch3的表达而减轻顺铂所致的肾小管上皮细胞凋亡。