p120-连环蛋白对大鼠急性肝衰竭的保护作用

摘要

目的 探讨p120-连环蛋白（p120cnt）表达对急性肝衰竭（ALF）内皮损伤和炎性激活的影响，分析p120cnt的抗炎效应是否可以通过对Epac1信号通路的调控来发挥作用。方法 查询GenBank中大鼠p120cnt cDNA文库，设计引物，PCR扩增目的基因，琼脂糖电泳鉴定结果。经酶切、连接克隆至带绿色荧光蛋白（GFP）的表达载体，转化E.Coli JM109并筛选阳性菌落，提取重组质粒后酶切，测序验证，确保表达框无误。选择健康雄性Wistar大鼠36只，按随机数字表法分为正常对照组、ALF模型组、质粒转染+ALF建模组，每组12只。脂多糖（LPS）联合D-GalN法构建ALF动物模型，使用裸质粒流体力学基因转染法转染大鼠，肝组织切片荧光显微镜观察转染是否成功。以上处理12 h后处死大鼠取肝组织切片进行HE染色及TUNEL分析，评估各组肝细胞坏死程度；半定量RT-PCR评估各组肝组织p120cnt mRNA及Epac1 mRNA表达水平。结果 PCR扩增目的基因，1.2%琼脂糖电泳显示目的基因约2800 bp。真核表达重组体pCMV/p120ctn提取质粒后酶切，酶切产物基因测序显示质粒构建正确。基因转染后大鼠肝组织切片内可见大量GFP表达说明转染已成功。大鼠肝组织切片HE染色及TUNEL分析说明质粒转染+ALF建模组肝细胞坏死严重程度低于ALF模型组。大鼠肝组织p120cnt mRNA表达强弱顺序为:正常对照组＞质粒转染+ALF建模组＞ALF模型组（均P<0.01）。大鼠肝组织Epac1 mRNA表达强弱顺序为：质粒转染+ALF建模组＞ALF模型组＞正常对照组(P<0.05或P<0.01)。结论 p120cnt存在对ALF的抗炎作用和肝保护作用；p120cnt对肝组织急性炎症的抑制效应与上调Epac1基因表达有关。