NS基因克隆及人成骨肉瘤细胞和人胚胎肾细胞NS基因的表达

摘要

目的:研究nucleostemin(核干细胞因子,NS)基因在人成骨肉瘤细胞(OS-732)和人胚胎肾细胞(HEK-293)的表达情况,并克隆该基因的部分片段.方法:以OS-732细胞和HEK-293细胞为实验材料,进行细胞总RNA的提取、反转录反应、PCR反应、NS基因片段的克隆及测序等.结果:(1)提取的总RNA质量很高,基本上无降解;(2)OS-732细胞和HEK-293细胞中均有NS基因的表达,并且在相同量底物的情况下,OS-732细胞NS基因的表达量明显高于HEK-293细胞;(3)将PCR产物成功地与pGEM-T克隆载体连接,构建为pGEM-T-NS质粒,测序结果表明NS基因片段序列与基因库中登陆的序列完全一致.结论:本文成功地从OS-732细胞和HEK-293细胞克隆到NS基因片段,OS-732细胞NS基因的表达量明显高于HEK-293细胞.