上皮细胞剪接调节因子-1真核表达载体的构建及表达

摘要

目的 构建人内皮细胞剪接因子-1真核表达载体pcDEF3-ESRP1,并观察其在HeLa细胞的表达.方法 以HeLa细胞cDNA为模板,用RT-PCR方法扩增ESRP1全编码区基因片段,将其连接入真核表达载体pcDEF3,并通过酶切及测序进行鉴定;通过脂质体介导法将真核表达载体pcDEF3-ESRP1转染至HeLa细胞,Western blot检测外源性ESRP1蛋白在HeLa细胞中的表达.结果 RT-PCR扩增得到人ESRP1 cDNA片段,重组质粒经酶切鉴定和DNA序列分析确定得到真核表达载体pcDEF3-ESRP1;Western blot实验证实转染重组质粒的HeLa细胞存在外源性的人ESRP1表达.结论 成功构建人ESRP1真核表达载体pcDEF3-ESRP1,为进一步研究ESRP1的生物学功能奠定了实验基础.