不同DNA聚合酶突变体与野生型检测性能的比较分析

摘要

目的将Taq DNA聚合酶(Taq酶)不同的突变体与其野生型进行对比,分析二者扩增性能及聚合性能的差异,探讨突变型Taq酶在乙型、丙型肝炎病毒患者临床检测中的性能优势。方法提取DNA构建突变库,逐步筛选出热稳定性提高且扩增效率较高的突变体;选取威海市立医院2020年1月至2021年8月收治的乙型肝炎病毒表面抗原阳性样本30例、丙型肝炎HCV RNA阳性样本30例,通过PCR-荧光探针法应用Taq酶突变体与野生型进行性能检测。结果在同等PCR循环次数下,Taq酶突变体CT值均低于野生型,即突变体的扩增效率高于野生型;对临床样本进行3次重复检测,突变体标准曲线的相关系数为0.99;将Taq酶突变体进行重复检测,批内及批间的检测浓度对数值的变异系数(CV%)均小于5%。结论不同DNA聚合酶的突变体与野生型相比具有较高的扩增活性及扩增效率,灵敏度及特异性的优势也较为显著。这一特性为进一步研究开发扩增效率更高的DNA聚合酶,推动现代分子生物检测技术、辅助乙肝及丙肝病毒临床检测的发展打下基础。