miR⁃200b靶向MAP2对缺氧缺糖诱导的大鼠皮质神经细胞损伤的影响

摘要

目的 研究miR?200b对缺氧缺糖诱导的大鼠皮质神经细胞损伤的影响及潜在机制.方法 将大鼠皮质神经细胞分为正常对照组(不做处理),缺氧缺糖模型组(含0.5 mmol/L连二亚硫酸钠的无糖Earle's液培养48 h),anti?miR?NC组、anti?miR?200b组、miR?NC组和miR?200b组,qRT?PCR检测细胞中miR?200b、calpain1 mRNA和MAP2 mRNA的含量,Western blot测定MAP2、calpain1、凋亡相关蛋白pro?caspase3和cl?caspase3的水平,CCK8法和流式细胞术分别检测细胞存活率和凋亡率,双荧光素酶报告系统验证miR?200b与MAP2的靶向关系.结果 与对照组相比,缺氧缺糖模型组大鼠皮质神经元细胞中miR?200b和calpain1 mRNA水平均升高(P<0.05),MAP2 mRNA水平降低(P<0.05),细胞存活率降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);在缺氧缺糖模型组大鼠皮质神经元细胞中抑制miR?200b可提高细胞存活率(P<0.05),降低细胞凋亡率(P<0.05),提高pro?caspase3、MAP2 mRNA和蛋白含量(P<0.05),降低cl?caspase3、calpain1 mRNA和蛋白含量(P<0.05),过表达miR?200b则结果相反;双荧光素酶报告实验结果表明,MAP2是miR?200b的靶点.结论 miR?200b可能靶向MAP2调控缺氧缺糖诱导的大鼠皮质神经细胞损伤和凋亡.