隐球菌保护性肽表位GMFDGLSGV多聚体重组表达及鉴定

摘要

目的 重组表达隐球菌保护性肽表住GMFDGLSGV二聚体、四聚体、八聚体,以进一步探讨其免疫效应.方法 选取隐球茵抗原表住GMFDGLSGV,引入Th表住PADRE及木马肤序列(RKKRRQRRR).并以RVKR序列作为接头,分别合成隐球菌保护性肽表位GMFDGLSGV二聚体、四聚体、八聚体全基因序列,经PCR扩增后分别插入融合表达栽体pGEX-4T-1,将重组质粒转入大肠埃希氏茵BL21并以IPTG诱导表达,进一步经GST亲合层析柱纯化,经SDS-PAGE和Western-blot鍪定重组表达蛋白.结果 成功构建了隐球菌保护性表位GMFDGLSGV二聚体、四聚体、八聚体的表达质粒,并经IPTG诱导表达了大小约为32 000,36 000,42 000的融合蛋白.结论 隐球菌保护性肽表住GMFDGLSGV多聚体的重组表达为进一步开发隐球菌疫苗提供有价值的依据.