SARS-CoV相关重组B细胞线性多表位肽的表达及鉴定

摘要

目的 利用已筛选到的线性B细胞表位组合得到重组多表位肽,并验证其用做表位肽疫苗的可行性.方法 用搭桥PCR和人工合成DNA方法获得多表位肽编码基因片段,构建原核表达载体表达多表位肽.ELISA法测其与SAILS患者血清的交叉反应性及其用于免疫动物获得的多克隆抗血清的效价.Western blot检测抗原抗体结合特异性.中和试验检测中和SARS-COV效果.结果 成功获得PEP1和PEP2编码基因片段并表达重组多表位肽rPEP1和rPEP2.纯化的rPEP1和rPEP2与患者血清的交叉反应率分别为88.7%和97.2%;与免疫动物血清具有结合特异性,结合效价分别为1×106和5×105;中和SARS-CoV的效率分别为70%和80%.结论 成功获得交叉反应性好、免疫原性强的重组多表位肽rPEP1和rPEP2,为制备多表位肽疫苗提供了实验依据.