犬心房肌细胞分离方法的改良及影响因素探讨

摘要

目的 建立高效稳定的犬心房肌细胞分离方法,获得高质量的心房肌细胞,为研究离子通道疾病提供合格的单个细胞.方法 健康成年犬12只,一种方法在心脏左回旋支处插管,剪去左右心室以及室间隔组织,含钙台式液灌流(改良方法),另一种方法在心脏左回旋支处插管后固定,无钙台式液灌流,再剪去多余组织(传统方法),灌注胶原酶分离心房心肌细胞.倒置相差显微镜下观察心肌细胞形态变化,台盼蓝染色法检测细胞存活率,膜片钳技术检测起搏电流.结果 两种方法比较,改良方法心房肌细胞的成活率显著高于传统方法(P<0.05),细胞的自主收缩率显著低于传统方法(P<0.05);胶原酶的消化时间显著减少(P<0.05),并且胶原酶的使用量少(P<0.05).改良方法分离的心房肌细胞形态呈杆状,边缘锐利,横纹清晰状态良好,并可以记录到完整的起搏电流.结论 改良方法操作简单,分离心房肌细胞成活率高,可以记录到稳定、完整的起搏电流,节约实验成本和时间,为心房离子通道疾病相关研究提供良好的细胞模型.