黄芩苷联合连翘苷对甲型流感病毒核蛋白基因表达的影响

摘要

目的病毒的高变异率,使得抗病毒药物的研发显得非常重要,文中探讨黄芩苷联合连翘苷对甲型流感病毒核蛋白(Nucleoprotein,NP)基因表达的影响。方法通过瞬时转染技术将甲型流感病毒核蛋白真核重组质粒pc DNA3.1(+)/核蛋白导入Hela细胞以建立甲型流感病毒核蛋白真核表达载体,检测黄芩苷(15.625μg/m L)联合连翘苷(12.5μg/m L)组核蛋白基因表达量。选用低、中浓度的黄芩苷(IC25、IC50)联合低、中、高浓度的连翘苷(IC25、IC50、IC75)进行药物联合实验,实验分为Hela细胞对照组;脂质体对照组;重组质粒转染组;黄芩苷IC25+连翘苷IC25组;黄芩苷IC25+连翘苷IC25组;黄芩苷IC25+连翘苷IC75组;黄芩苷IC50+连翘苷IC50组;黄芩苷IC50+连翘苷IC50组;黄芩苷IC25+连翘苷IC75组。转染后使用各实验组药物进行干预,继续培养48 h后,采用反转录-实时荧光定量PCR(RT-qPCR)测定各实验组Hela细胞内核蛋白基因的拷贝量,评价黄芩苷联合连翘苷对靶细胞核蛋白基因表达的影响,并分析药物联合作用效果。结果重组质粒转染组核蛋白基因表达量为(62.868±13.587)×104copies/μL,Hela细胞对照组为(2.131±0.172)×104copies/μL,脂质体对照组为(1.627±0.489)×104copies/μL,黄芩苷联合连翘苷组为(7.596±2.066)×104copies/μL。黄芩苷IC25+连翘苷IC25组、黄芩苷IC25+连翘苷IC50组、黄芩苷IC25+连翘苷IC75组对靶细胞核蛋白基因表达的抑制率分别为:(37.87±9.11)%、(58.65±5.53)%、(79.12±5.35)%。通过Compu Syn软件分析药物联合指数CI分别为:1.242、0.954、0.947。黄芩苷IC50+连翘苷IC25组、黄芩苷IC50+连翘苷IC50组、黄芩苷IC50+连翘苷IC75组对靶细胞核蛋白基因表达的抑制率分别为:(62.00±4.26)%、(70.87±3.06)%、(83.00±2.90)%。通过Compu Syn软件分析药物联合指数CI分别为:0.895、0.855、0.892。黄芩苷联合连翘苷对核蛋白基因的表达的抑制作用总体表现为协同作用,低浓度黄芩苷与低浓度连翘苷起拮抗作用CI>1;其余浓度间联合起协同作用CI<1。结论黄芩苷联合连翘苷能够下调转染Hela细胞的甲型流感病毒核蛋白基因表达量,并且在一定浓度范围内显示出协同作用。