过表达lncRNA HOTAIR基因的风湿关节炎成纤维样滑膜细胞稳定株构建与筛选

摘要

目的 HOTAIR基因与类风湿关节炎(RA)血管翳的形成紧密相关。文中旨在建立并筛选过表达lncRNA HOTAIR的人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA)稳定株,为进一步研究lncRNA HOTAIR在RA发病中的作用奠定基础。方法采用PCR扩增lncRNA HOTAIR目的基因,连接到BamHI-HF-HF和XhoI酶切后的PMT406载体上,构建好的质粒经测序鉴定后,转染293T细胞包装慢病毒,分别用重组质粒及空载体慢病毒感染HFLS-RA,构建和筛选稳转株;采用Trizol法分别提取空白细胞、阴性转染细胞和过表达细胞的总RNA后,反转录得到cDNA进行qPCR扩增,根据检测结果进行相对表达量的计算。结果过表达细胞的lncRNA HOTAIR相对表达量(30.329±3.860)较空白细胞和阴性转染细胞(1.001±0.048、0.892±0.247)明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。说明过表达lncRNA HOTAIR的HFLS-RA细胞稳定株构建成功。结论成功构建了过表达lncRNA HOTAIR的HFLS-RA细胞稳定株,为进一步探究lncRNA HOTAIR在RA发生发展中的作用提供了实验材料。