丙型肝炎病毒核心区与IgG Fc段融合基因疫苗的构建及表达

摘要

目的 :构建能同时表达丙型肝炎病毒核心区与IgGFc段的融合基因真核表达载体 pcDNA3HCVC Fc ,为下一步修饰和转染树突状细胞 ,制备能高效表达HCVC和Fc基因的树突状细胞疫苗做准备。　方法 :用分别含有XholⅠ和XbaⅠ双酶切位点的人免疫球蛋白 (IgG)Fc区基因上、下游引物 ,以含有人IgG基因序列的质粒pCMVsFc为模板 ,通过PCR扩增获得Fc区基因片段 ,基因片段回收后 ,以XholⅠ和XbaⅠ双酶切 ,定向插入到含HCVC基因的质粒PcDNA3HCVC下游双粘端位点之间 ,获得重组表达质粒pcDNA3HCVFc。通过酶切、PCR及插入片段序列测定对质粒进行鉴定。以抗HCVC和抗Fc单克隆抗体为一抗 ,利用间接免疫荧光法检测 pcDNA3HCV Fc在人肝癌细胞 772 1中的瞬时表达。　结果 :酶切、PCR及测定鉴定证实 ,pcDNA3HCV Fc插入片段为Fc区基因片段 ,免疫荧光法检测表明其可以在 772 1细胞中瞬时表达。　结论 :构建的质粒 pcDNA3HCV Fc可以在772 1细胞中瞬时表达Fc基因 ,为研究HCVC Fc融合基因修饰的树突状细胞的功能奠定了基础。