Smad4/DPC4基因小发夹RNA质粒表达载体的构建和鉴定

摘要

目的:构建Smad4基因小发夹RNA(shRNA)表达载体.方法:设计、合成3对编码Smad4基因shRNA的寡核苷酸序列,并分别将其克隆入pGCsi-H1/Neo/GFP质粒,酶切、测序鉴定,脂质体法转染293细胞.实时荧光定量PCR检测RNA干扰(RNAi)的抑制效果.结果:在经HindⅢ和BamH Ⅰ双酶切分别鉴定三种重组载体后,DNA测序证实小干扰RNA(siRNA)序列正确,并被准确克隆入载体.实时荧光定量PCR检测结果表明三种重组载体psiSmad4-1、psiSmad4-2和psiSmad4-3载体,分别对293细胞中Smad4基因mRNA表达的特异性抑制率为39.00%、8.80%和73.80%.结论:成功构建Smad4 pGCsi-H1/Neo/GFP/shRNA质粒,为后期研究Smad4基因在肿瘤细胞中的作用机制和基因治疗打下基础.