转录因子SP1诱骗性寡核苷酸对猪血管内皮细胞α半乳糖苷链表达的影响

摘要

目的:探讨转录因子SP1诱骗性寡核苷酸(decoy ODN)对猪血管内皮细胞系(SV-40-PED)膜蛋白α半乳糖苷链(α Gal)表达的影响.方法:SP1诱骗性寡核苷酸转染猪血管内皮细胞系,细胞爬片后荧光显微镜下观察α Gal抗原表位的表达;蛋白印迹法(Western blot)检测蛋白表达情况;RT-PCR法检测SV-40-PED转染前后α1,3半乳糖转移酶(α1,3GT)mRNA.结果:荧光显微镜下细胞爬片可见转染组(decoy ODN组)细胞膜荧光表达明显减弱,部分部位可见点状荧光缺损.Western blot显示decoy ODN/PED的α Gal相对吸光度值为48.2±0.9,仅为空转染组(只含有转染试剂oligofectamine)91.6±1.7的52.6%(P＜0.05).转染组α1,3GT基因异构体的mRNA表达量(异构体1为0.42±0.20;异构体2为0.27±0.12)显著低于空转染组(异构体1为0.72±0.17;异构体2为0.50±0.19;P＜0.05),但错配组(错义decoy ODN组)及空转染组相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论:SP1 decoy ODN可以靶向性抑制猪血管内皮细胞系α Gal基因的表达.