食管癌相关基因1在甲醇酵母中的表达与纯化

摘要

目的为获得食管癌相关基因1(ECRG1)编码的活性蛋白,利用甲醇酵母系统表达ECRG1.方法将本研究室构建的PCDNA6-HA-ECRG1重组到分泌表达载体pPIC9k中,然后转入酵母GS115,通过G418筛选,在甲醇的诱导下,获得表达的蛋白.结果成功构建了分泌表达重组体pPIC9k-ECRG1,并转入了GS115,筛到抗2.5 mg/ml G418的重组菌株,在甲醇的诱导下,ECRG1蛋白得到了分泌表达,发酵培养获得的融合蛋白经镍离子亲和层析,得到纯度80 %左右的蛋白.结论用酵母表达系统得到了活性蛋白,可用于进一步的生物功能及作用机理的研究,也为今后研究基因-蛋白的功能与结构,提供了分离和纯化蛋白的重要方法.