生物素化sH-2Kd-HBc复合物单体的构建及纯化

摘要

目的构建及纯化生物素化的sH-2Kd-HBc复合物.方法以原核表达的sH-2Kd-BSP为重链,β2m为轻链,分别纯化后与H-2Kd限制性9肽(HBc131～139)在体外采用稀释法进行共折叠复性,然后在BirA酶作用下,对折叠产物进行生物素化,形成了生物素化的H-2Kd-HBc复合物.通过凝胶过滤层析法进一步纯化生物素化的复合物单体.结果原核表达质粒pET-H-2Kd-BSP的测序结果与GenBank所公布的序列一致.利用辣根过氧化物酶标记的亲和素对折叠复性及生物素化后的复合物进行检测,证明成功获得了生物素化的sH-2Kd-HBc复合物.结论获得了纯化的生物素化sH-2Kd-HBc复合物单体,为进一步在体外构建sH-2Kd-抗原肽四聚体及制备人工抗原提呈细胞,深入研究HBV感染过程中特异性CTL应答和效应机制奠定了基础.