可生物素化sH-2Dd-HBs复合物的构建及鉴定

摘要

目的构建可生物素化sH-2Dd-HBs复合物.方法采用RT-PCR技术,从BALB/c小鼠脾细胞中克隆出H-2Dd基因的胞外区和β2m基因,将前者拼接上依赖BirA酶的可生物素化序列(BSP)后,分别装入pET-28a(+)高效表达载体,诱导表达后纯化目的蛋白.将上述过程制备的sH-2Dd-BSP作为重链,β2m作为轻链,与H-2Dd限制性9肽(HBs 201～209氨基酸)在体外稀释复性.结果原核表达载体pET-sH-2Dd-BSP和pET-2 m的测序结果与GeneBank所公布的序列一致.对表达产物进行纯化与复性,利用仅识别完整构象的单克隆抗体对复性后产物进行检测,证明成功构建了可生物素化sH-2Dd-HBs复合物.结论获得可生物素化sH-2Dd-HBs复合物,为进一步利用亲和素在体外构建H-2Dd-HBs四聚体(Tetramer),深入研究HBV感染过程中特异性CTL应答和效应机制奠定了实验基础.