肝脏内源性microRNA调控乙型肝炎病毒基因的表达与复制

摘要

目的 探讨肝脏内源性microRNA对乙型肝炎病毒(HBV)复制与基因表达的影响.方法 通过miRNA靶点分析软件寻找与HBV序列之间相关联的肝脏内源性microRNA, 体外化学合成相应的microRNA分子,将合成寡核苷酸及对照与1.3倍HBV全基因组真核表达质粒pUC18-HBV1.3采用Lipofectamine2000共转染HepG2细胞,转染48 h后收集细胞培养上清;通过ELISA检测HBsAg、HBeAg的表达水平; Western 印迹检测HBcAg的表达水平;Trizol抽提转染细胞RNA,逆转录后用荧光定量PCR检测HBV mRNA的水平; 提取细胞基因组DNA, Southern印迹检测HBV的复制中间体.经以上检测从HBV蛋白表达、转录和复制水平评价相应的microRNA作用效应.结果 生物信息学方法提示miR-16和 miR-122存在与HBV 基因组作用的可能结合位点.经试验初步证实miR-16可下调HBV蛋白的表达及HBV DNA水平;miR-122可下调HBsAg、HBeAg的表达,上调HBV mRNA的水平.结论 肝脏内源性microRNA可以调节HBV的复制与基因表达.