过表达E-Cadherin通过抑制Smad-3磷酸化对胃癌侵袭和迁移的调控作用

摘要

目的探究过表达上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)对胃癌侵袭和迁移的影响及其潜在的作用机制。方法实时荧光定量PCR (real-time quantitative PCR, qRT-PCR)检测胃癌组织和胃癌细胞株中E-cadherinmRNA的表达水平;蛋白质印迹检测胃癌细胞株中E-cadherin蛋白表达水平;构建E-cadherin过表达MKN45细胞株,qRT-PCR和蛋白质印迹检测转染效果;体外侵袭实验检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;蛋白质印记检测基质金属蛋白酶2 ( matrix metalloproteinase 2, MMP-2)、MMP-9、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、Smad-3,视黄醇结合蛋白(retinol bingding proteins,RBP2)的表达水平;皮下注射MKN45细胞构建胃癌移植瘤裸鼠模型;记录裸鼠存活率,检测移植瘤体积;25 d后处死实验动物,检测各组大鼠肿瘤重量;qRT-PCR和Western印迹检测肿瘤组织中E-cadherin的表达情况;Western印迹检测肿瘤组织中MMP-2 , MMP-9、VEGF、Smad-3、RBP2的表达水平。结果胃癌组织和胃癌细胞中E-cadherin mRNA和蛋白低表达;成功构建E-cadherin高表达的MKN45细胞株。MKN45细胞中E-cadherin过表达后,侵袭细胞数目显著减少,划痕闭合率显著降低,细胞中MMP-2、MMP-9、VEGF、p-Smad-3、RBP2的表达水平显著降低。MKN45移植瘤中E-cadherin过表达后,荷瘤裸鼠的存活率显著升高,肿瘤体积显著降低,移植瘤组织中MMP-2、MMP-9、VEGF、p-Smad-3、RBP2的表达水平显著降低。结论过表达E-cadherin通过抑制Smad-3的磷酸化,进而抑制胃癌侵袭和迁移。