巢式RT-PCR检测E-cad mRNA相对含量的实验条件探讨

摘要

目的探讨巢式RT-PCR检测肺组织中E-cad mRNA相对含量的最适实验条件.方法通过改变巢式RT-PCR反应体系各组分的浓度和反应条件,探讨巢式RT-PCR反应体系最适浓度和反应条件.结果巢式RT-PCR反应体系为dNTP200μmol/L,MgCl21.5mmol/L,引物600nmol/L,Taq DNA聚合酶0.1U/μL,模板50ng,10×反应缓冲液2.5μL,总体系25μL.反应条件为95℃预变性10min,95℃1min、66℃1min、72℃1min,第2次PCR为35个循环,最后72℃延伸10min.结论建立了E-cad mRNA的相对定量检测方法.