脆性位点基因WWOX调控人胆囊癌细胞的体外增殖效应

摘要

目的探讨脆性基因WWOX调控胆囊癌细胞的增殖效应及其机制．方法将前期成功构建的pcDNA3．0-WWOX重组质粒按脂质体介导转染GBC—SD细胞，同时转染空载体、脂质体为阴性对照及GBC—SD为空白对照．转染48h后采用倒置显微镜观察各组胆囊癌细胞形态学变化，MTF、BrdU检测胆囊癌细胞增殖水平，流式细胞仪检测细胞增值周期的变化．结果倒置显微镜观察pcDNA3．0-WWOX组GBC—SD细胞数量明显减少，悬浮细胞及细胞碎片增加，而Vectorcontrol、NC、Mock组细胞呈正常增殖状态．M1Tr检测显示pcDNA3．0-WWOX组GBC—SD细胞增殖于24h、48h、72h、96h、120h低于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05），并随时间推移，pcDNA3．0-WWOX组细胞增殖活性抑制明显．BrdU检测显示pcDNA3．0-WWOX组细胞增殖率为（0．44±0．03），对照组分别为（0．78±0．02），（0．81±0．01），（0．85±0．01），表明pcDNA3．0-WWOX组细胞增殖活性较对照组降低，差异有统计学意义（P〈0．05）．细胞周期检测发现pcDNA3．0-WWOX组GO／G1期细胞增多，G2／M期和S期细胞减少，细胞凋亡率较对照组（Vector control，NC，Mock）明显增高、增殖指数下降（P〈0．05），而对照组间差异无统计学意义（P〉0．05）．结论过表达WWOX基因体外可有效抑制胆囊癌细胞增殖活性，WWOX可能参与胆囊癌细胞恶性生物学行为的发展过程，有望成为胆囊癌基因治疗新的潜在靶点．