siRNA抑制人卵巢癌KLK6基因表达的实验研究

摘要

目的 探讨siRNA沉默KLK6基因表达对卵巢癌细胞生长的抑制作用及其机制,为卵巢癌的基因诊断和治疗提供理论依据.方法 针对KLK6 mRNA 序列设计合成siRNA,构建2个重组质粒PGCsilencerTMH1/GFP/Neo/KLK6和PGCsilencerTMH1/GFP/Neo/Non;将重组质粒导入卵巢癌SKOV-3细胞株,G418筛选获得稳定转染的细胞株;实验分为脂质体对照、阴性质粒转染对照及KLK6 siRNA 重组质粒转染组,实时荧光定量PCR 法检测KLK6 mRNA 的表达的变化,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测量细胞生长情况.结果 测序证实表达载体构建成功,在稳定转染重组质粒PGCsilencerTMH1/GFP/Neo/KLK6的卵巢癌SKOV-3细胞株中,KLK6 mRNA抑制率(76%)明显高于阴性质粒对照组(2.7%),SKOV-3细胞增殖活性显著低于阴性对照组和脂质体对照组.结论 重组质粒PGCsilencerTMH1/GFP/Neo/KLK6可抑制卵巢癌细胞中KLK6基因的表达,并抑制卵巢癌细胞的生长.