重组质粒pPIC9K-pZP3α-hCGβ CTP109～145的构建

摘要

目的:为发展多特异性避孕疫苗,制备重组抗原pZP3α-hCGβ CTP109～145,用基因工程技术构建重组质粒pPIC9K-pZP3α-hCGβ CTP109～145. 方法:根据pZP3α全长和hCGβ CTP109～145编码的DNA列设计两对引物,通过部分重叠聚合酶链式反应(overlapping PCR),扩增出pZP3α-hCGβ-CTP109～145DNA片断,克隆到载体质粒pPIC9K中,然后导入大肠杆菌DH5α,用PCR和双酶切反应鉴定重组质粒,并用DNA测序仪对重组质粒测序. 结果:3步PCR扩增出pZP3α-hCGβ-CTP109～145DNA片段,插入到载体质粒pPIC9K的克隆位点,获得重组pPIC9K-pZP3α-hCGβ-CTP109～145表达质粒,测序结果显示插入序列与设计预期完全一致. 结论:重组质粒pPIC9K-pZP3α-hCGβ-CTP109～145构建成功,为表达重组抗原pZP3α-hCGβ-CTP109～145,探讨重组多特异性避孕疫苗抗生育效能的研究建立基础.