重组质粒pPIC9K-pZP3α-hCGβCTP～（109～145）的构建及重组抗原pZP3 α-hCG β CTP～（109~145）在毕赤酵母中的表达

摘要

目的：为发展多特异性避孕疫苗，用基因工程技术构建重组质粒pPIC9K-pZP3α-hCGβ-CTP，在巴氏毕赤酵母(Pichiapastoris)中表达重组抗原pZP3α-hCGβ-CTP。方法：根据pZP3α全长和hCGβCTP编码的DNA序列设计两对引物，通过部分重叠聚合酶链式反应(overlappingPCR)，扩增出pZP3α-hCGβ-CTPDNA片断，克隆到载体质粒pPIC9K中，然后导入大肠杆菌DH5α，用PCR和双酶切反应鉴定重组质粒，并用DNA测序仪对重组质粒测序，构建好的重组质粒pPIC9K-pZP3α-hCGβ-CTP，用电打孔方法转入巴氏毕赤酵母，用缺组氨酸的MD平板筛选阳性株，并在含G418的YPD培养基中筛选多拷贝插入菌株，用甲醇诱导表达，鉴定表达产物。结果：3步PCR扩增出pZP3α-hCGβ-CTPDNA片段，插入到载体质粒pPIC9K的克隆位点，获得重组pPIC9K-pZP3α-hCGβ-CTP表达质粒，测序结果显示插入序列与设计预期完全一致。

目录

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一 前言

二 实验材料和试剂

三 实验方法

四 实验结果

五 讨论

六 附录

七 参考文献

八 在校期间发表论文情况

九 致谢