一种定量检测大黄鱼感染变形假单胞菌方法的建立与应用

摘要

变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicid)是引起大黄鱼(Larimichthys crocea)内脏白点病的主要病原。基于变形假单胞菌的 gyrB 基因与大黄鱼的单拷贝基因 gdf-8 分别设计1对特异性引物,对所设计的变形假单胞菌 gyrB 基因的引物特异性进行了检验,并采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测了400尾人工浸泡感染变形假单胞菌5 d后的大黄鱼幼鱼脾脏中的病原菌的相对含量。结果显示,基于 gyrB 基因所设计的引物对变形假单胞菌检测具有良好的特异性,可以用于对变形假单胞菌的定性和定量检测;400尾人工攻毒大黄鱼幼鱼脾脏中变形假单胞菌的相对含量(相对带菌量,用 gyrB 基因拷贝数与大黄鱼 gdf-8 基因拷贝数之比表示)变化在5.04×10^-7 ~0.482之间,不同个体之间的相对带菌量差异很大,说明不同个体的大黄鱼对变形假单胞菌感染的抵抗力有很显著的差异。