解毒通络方通过TGF-β1/Smad和ROCK通路对大鼠心肌纤维化的改善作用

摘要

目的:探讨解毒通络方在大鼠心肌纤维化进程中的作用,并阐明其作用机制.方法:30只SPF级Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、卡托普利组、低剂量解毒通络方组和高剂量解毒通络方组(n=6),以5 mg·kg-1盐酸异丙肾上腺素皮下注射法复制大鼠心肌纤维化模型,卡托普利组、低剂量解毒通络方组和高剂量解毒通络方组大鼠分别用0.005 g·kg-1·d-1卡托普利和1、5 g·kg-1·d-1解毒通络方灌胃28 d,对照组和模型组大鼠灌胃给予等体积蒸馏水,苏木素-伊红(HE)和Masson三色染色观察大鼠心肌组织病理形态表现并计算胶原纤维面积百分率,碱水解法检测大鼠心肌组织中羟脯氨酸水平,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠心肌组织中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平,免疫组织化学法检测转化生长因子β1(TGF-β1)和LIM激酶(LIMK)蛋白表达水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测大鼠心肌组织中Smad2、Smad3和Rho相关蛋白激酶(ROCK)mRNA表达水平,Western blotting法检测大鼠心肌组织中磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)和ROCK蛋白表达水平.结果:注射异丙肾上腺素28 d后,大鼠心肌组织呈典型纤维化改变,与正常对照组比较,模型组大鼠心肌组织中胶原纤维面积百分率及羟脯氨酸和AngⅡ水平明显升高(P<0.05),TGF-β1和LIMK蛋白表达水平明显升高(P<0.05),Smad2、Smad3和ROCK mRNA表达水平明显升高(P<0.05),p-Smad2/3和ROCK蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,卡托普利组、低剂量解毒通络方组和高剂量解毒通络方组大鼠心肌组织中胶原纤维面积百分率及羟脯氨酸和AngⅡ水平明显降低(P<0.05),TGF-β1和LIMK蛋白表达水平明显降低(P<0.05),Smad2、Smad3和ROCK mRNA表达水平明显降低(P<0.05),p-Smad2/3和ROCK蛋白表达水平明显降低(P<0.05).与卡托普利组比较,不同剂量解毒通络方组大鼠上述指标差异均无统计学意义(P>0.05).结论:解毒通络方可通过抑制TGF-β1/Smad和ROCK通路延缓大鼠心肌纤维化进程.