敲低着丝粒蛋白U对顺铂耐药卵巢癌细胞自我更新、顺铂耐药和Wnt/β-catenin信号活性的抑制作用

摘要

目的:探讨下调着丝粒蛋白U(CENPU)对卵巢癌(OC)细胞顺铂耐药的影响,并分析其作用机制.方法:采用Western blotting法检测OC细胞(OVCAR3和SKOV3细胞)和顺铂耐药OC细胞(OVCAR3/DDP和SKOV3/DDP细胞)中CENPU蛋白表达水平.将OVCAR3/DDP和SKOV3/DDP细胞分为shControl组(转染shControl质粒)和CENPU短发夹RNA质粒(shCENPU)组(转染shCENPU质粒).CCK-8法检测0～100μmol·L-1顺铂刺激24 h后2组细胞活性,流式细胞术检测20μmol·L-1顺铂刺激24 h后2组细胞凋亡率,肿瘤球形成实验检测2组细胞的细胞球形成率(SFE),实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组细胞中自我更新相关基因性别决定区Y框蛋白2(Sox2)、Nanog和八聚体结合转录因子4(Oct4)mRNA表达水平,Western blotting法检测2组细胞中Wnt/β-catenin通路相关蛋白无翅型MMTV整合位点家族成员1(Wnt1)、细胞周期素D1(cyclinD1)、c-Myc和β-连环素(β-catenin)蛋白表达水平.结果:与OVCAR3和SKOV3细胞比较,OVCAR3/DDP和SKOV3/DDP细胞中CENPU蛋白表达水平均明显升高(P<0.05).顺铂作用后,与shControl组比较,shCENPU组OVCAR3/DDP和SKOV3/DDP细胞活性明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05).与shControl组比较,shCENPU组OVCAR3/DDP和SKOV3/DDP细胞的SEF,细胞中Sox2、Nanog和Oct4 mRNA水平以及Wnt1、cyclin D1、c-Myc和β-catenin蛋白表达水平均明显降低(P<0.05).结论:敲低CENPU能抑制顺铂耐药OC细胞的自我更新、顺铂耐药和Wnt/β-catenin信号活性.