PcDNA16-53融合表达载体的构建

摘要

目的:利用基因重组方法构建出含有抑癌基因P16,P53的融合表达载体.方法:用限制性内切酶EcoRI、XhoI双酶切P16A,用NheI、XhoI双酶切PMAMneo53.采用低熔点琼脂糖凝胶挖块回收法回收P16、P53基因片段,片段长度分别为800 bp、1 800bp.分别经抽提、沉淀、漂洗,使基因片段进一步纯化.利用定向克隆技术将P16、P53基因片段顺向插入经EcoRI、XhoI双酶切后的pcDNA3,再次转化后经快速鉴定筛选出pcDNA16-53融合表达载体.结果:P16、P53的融合表达载体大小8 000 bp、插入方向为正向.结论:用基因重组技术可以将两个抑癌基因构建在一个表达载体中进行表达,这为利用多基因治疗肿瘤的基础研究与临床研究提供了前提条件.