人白细胞介素-6基因的克隆表达和纯化的研究

摘要

目的:研究人IL-6基因在大肠杆菌中的高效表达及表达产物的纯化.方法:采用RT-PCR方法克隆了人IL-6 cDNA,用pBV220载体对IL-6基因进行了表达调控研究,用阴离子交换柱和凝胶柱对表达产物进行纯化,用MTT法测定rhIL-6的活性.结果:表达调控研究发现,当SD序列到ATG之间的距离为6 bp和10 bp时在SDS-PAGE胶上未见明显表达,而当距离为5 bp、7 bp、8 bp、9 bp时均可获高效表达,最高表达量占菌体总蛋白的26%.表达产物经变性复性及纯化后产品纯度达98%,比活性为1.1×108U/mg.结论:本研究为rhIL-6的中试生产奠定了坚实的基础.