核转位序列敲除的人类aFGF对NIH3T3细胞的促分裂活性及其机制

摘要

目的:研究核转位序列敲除的人类酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对NIH3T3细胞促分裂活性的影响.方法:实验分4组,即野生型aFGF(waFGF)、重组型aFGF(raFGF)、waFGF加肝素(HS,waFGF+HS)和raFGF+HS.采用MTT法检测NIH3T3细胞增殖,通过流式细胞术检测NIH3T3细胞凋亡,采用RT-PCR法检测bcl-2、p53和c-fos基因的表达.结果:当raFGF或waFGF浓度10～40 μg·L-1时,raFGF组细胞的增殖作用明显低于waFGF组(P＜0.001);waFGF+HS组和raFGF+HS组均明显高于单纯waFGF或raFGF组(P＜0.001).waFGF和raFGF均可导致NIH3T3细胞凋亡百分数下降,即存活的细胞增多,但raFGF作用弱于waFGF.c-fos基因在waFGF和waFGF+HS组的表达量均高于raFGF和raFGF+HS组;p53基因表达在waFGF和raFGF两组表达增高;bcl-2基因在waFGF+HS组表达最高,其次是waFGF和raFGF两组.结论:与waFGF比较,raFGF具有较弱的促分裂活性,但仍具有刺激DNA合成和细胞增殖的能力及抑制NIH3T3细胞凋亡的作用.HS具有增强aFGF活性的作用,可作为aFGF体外实验中模仿机体内环境的辅助因子.