hβ2GPⅠ第一功能区基因单体和二串联体的克隆和表达

摘要

目的:构建hβ2GPⅠ(hβ2GPⅠ)第一功能区基因单体及二串联体的原核表达载体PQE30-β2GPI-DI和PQE30-β2GPⅠ-DI2,并在大肠杆菌M15中进行高效表达.方法:应用PCR技术扩增hβ2GPⅠ第一功能区基因的单体β2GPⅠ-DI,并根据同尾酶特性构建hβ2GPⅠ第一功能区基因二串联体β2GPⅠ-DI2,将获得的单体和二串联体分别与PGEM-T easy载体连接测序,测序正确后分别克隆于原核表达载体PQE30中,构建成重组表达载体PQE30-β2GPⅠ-DI和PQE30-β2GP Ⅰ-DI2,在大肠杆菌M15中以l mmol·L-1IPTG诱导蛋白表达,经Western blotting鉴定目的蛋白的抗原性.结果:表达了hβ2GPⅠ第一功能区基因的单体及二串联体的蛋白,相对分子质量约为9 000和17 000,其表达量均可达菌体总蛋白的25%,并具有hβ2GPⅠ的抗原性.结论:成功构建了hβ2GPⅠ第一功能区基因的单体及二串联体的原核表达载体,并诱导了蛋白的高效表达.