血管内皮生长因子基因在兔骨髓间充质干细胞中的转染和表达

摘要

目的:探讨应用人血管内皮生长因子165(hVEGF165)进行基因修饰的可行性,为血管化组织工程组织的构建及缺血性疾病的治疗奠定实验基础.方法:构建pcDNA3.0-VEGF165真核表达载体,利用脂质体介导转染兔骨髓间充质干细胞(MSCs),ELISA方法检测转基因MSCs的hVEGF蛋白表达情况,MTT法检测转基因MSCs表达物对血管内皮细胞增殖活性的影响,设单纯培养MSCs及pcDNA3.0转染MSCs组为对照组.结果:成功构建hVEGF真核表达载体,并成功地将其转入MSCs中;MSCs细胞在转染pcDNA3.0-VEGF165质粒24、48和72 h后,其培养上清中hVEGF蛋白表达量均较对照组显著升高(P＜0.05),至G418筛选后12代,转基因MSCs培养上清中仍有hVEGF蛋白的表达,含2%、4%、8%、16%和32%转基因细胞培养上清的培养液均明显增加血管内皮细胞的增殖率,与对照组比较,差异均具有显著性(P＜0.05).结论:hVEGF165基因成功地转染至MSCs中,并可进行有效地表达.