缺氧对体外培养大鼠耳蜗毛细胞的损伤作用

摘要

目的:建立耳蜗器官体外培养模型,观察缺氧对体外培养耳蜗内毛细胞(IHC)及外毛细胞(OHC)的影响.方法:分离生后3 d Wistar大鼠耳蜗基底膜,平铺在含有DMEM培养液的培养基内(每盘6条基底膜),2盘为1组,随机分为8组,放置在37℃、5%CO2培养箱培养,其中7组作为实验组,按不同时间段进行缺氧(37C、90%N2、5%CO2、5%O2)培养;1组作为对照组放置在37℃、5%CO2培养箱.采用Phalloidin荧光标记观察耳蜗中IHC及OHC形态变化并计数单位面积(24 mm×36 mm)细胞数即细胞密度.结果:在缺氧早期(0.5 h)IHC形态及密度无明显变化;1 h细胞轻度肿胀,体积增大,单位面积细胞数减少,细胞密度与对照组比较差异无显著性(P＞0.05);2 h时IHC散在缺失,细胞密度与对照组比较差异有显著性(P＜0.01);6 h时IHC缺失增多,并可见毛细胞坏死后遗留的"空神经杯"现象,细胞密度与对照组比差异有显著性(P＜0.01);随缺氧时间延长,IHC缺失逐渐加重.OHC在缺氧早期(0.5 h、1 h)形态学改变不明显,2 h偶见细胞缺失,随缺氧时间延长,6 h后出现不同程度的排列拥挤、紊乱及缺失,单位面积细胞数目减少,细胞密度与对照组比较差异有显著性(P＜0.01),以48 h最严重.结论:缺氧造成体外培养耳蜗毛细胞缺失,以IHC为重.