蛋白激酶CK2β小干扰RNA促进小鼠受精卵早期发育

摘要

目的:利用特异性小发夹RNA(siRNA)寡核苷酸片段,研究蛋白激酶CK2调节亚基CK2β对小鼠受精卵早期发育的影响,阐明调控小鼠受精卵早期发育的机制.方法:超排卵获得小鼠1-细胞期受精卵,分别显微注射TE缓冲液、scramble siRNA和CK2β siRNA,收集卵细胞后用RT-PCR和Western blotting方法检测CK2β siRNA的干涉效能；相差显微镜观察受精卵的形态变化、计数卵裂率；放射自显影测定M期促进因子(MPF)活性.结果:与TE缓冲液和scramble siRNA组比较,CK2β siRNA组CK2β的mRNA水平和蛋白表达显著降低(P＜0.01),MPF的活性明显升高(P＜0.01),在人绒毛膜促性腺激素(hCG)注射后28.5h达到高峰；受精卵第一次有丝分裂加速,CK2β siRNA组在hCG注射后28.5 h大多数受精卵已经分裂为2-细胞期胚胎；hCG注射后32.0 h卵裂率为89.5％,与TE缓冲液和scramble siRNA组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论:CK2β siRNA通过提前激活MPF活性,进而促进小鼠1-细胞期受精卵的发育.