人热敏瞬时受体通道1基因转染对猫角膜内皮细胞P27蛋白表达的影响

摘要

目的:探讨人热敏瞬时受体通道1(TRP1)基因转染对猫角膜内皮细胞P27蛋白表达的影响,探讨热敏TRP1基因对角膜内皮细胞增殖周期的作用,为该基因应用于人角膜内皮细胞提供理论依据.方法:将20只健康足月幼猫随机分为实验组和对照组,每组10只,麻醉后取角膜内皮细胞进行培养,培养后实验组细胞通过脂质体介导的方法转染人热敏TRP1基因,对照组采用5.0 μL PBS代替表达载体加入培养基.RT-PCR观察人热敏TRP1基因mRNA表达水平,Western blotting观察猫角膜内皮细胞内P27蛋白的表达.继续培养96 h观察目的基因转染对细胞分裂再生活性的影响.结果:细胞培养、加热后钙离子流入明显增多;人热敏TRP1基因转染后RT-PCR结果显示.实验组条带密度显著高于对照组(t＝2.21,P＝0.037);Western blotting结果显示,实验组P27蛋白表达显著高于对照组,差异有统计学意义(t＝ 2.53,P＝0.021);实验组和对照组有丝分裂指数、G1期细胞比例差异均有统计学意义(x2 ＝3.26,x2＝4.18,P＜0.05).结论:人热敏TRP1基因转染可以增加猫角膜内皮细胞P27蛋白表达,抑制角膜内皮细胞增殖.