胎儿骨髓MSCs中Bmi-1和p16基因表达与其复制老化的关系

摘要

目的:探讨胎儿骨髓间充质干细胞(MSCs)中Bmi-1和p16基因表达随传代次数增加的变化情况,阐明其与MSCs复制老化之间的关系.方法:取孕16、17和25周流产胎儿的股骨,利用贴壁培养法分离、培养、扩增骨髓MSCs.采用流式细胞术检测第5代MSCs中CD13、CD34、CD44、CD45、CD73、CD90、CD105、CD133和HLA-DR的表达；连续传代30代,诱导培养MSCs老化；用BrdU掺入率检测第5(P5)、15(P15)和30代(P30)骨髓MSCs的增殖能力；采用Real-time PCR法检测上述细胞中Bmi-1和p16基因mRNA的表达量.结果:从孕16、17和25周的流产胎儿股骨骨髓中均能分离、培养、扩增出MSCs,均表达CD13、CD44、CD73、CD90和CD105,不表达CD34、CD45、CD133和HLA-DR;随着MSCs的不断传代,细胞生长速度逐渐减慢,细胞变成扁平状,折光性下降.P5与P15MSCs的BrdU掺入率比较差异无统计学意义(P＞0.05),P30与P5和P15MSCs的BrdU掺入率比较均明显降低(P＜0.05).P5MSCs中Bmi-1 mRNA表达水平高于P15和P30MSCs(P＜0.05),P15 MSCs中Bmi-1 mRNA表达水平高于P30 MSCs(P＜0.05).P5与P15 MSCs中p16mRNA表达水平比较差异无统计学意义(P＞0.05),但P30 MSCs中p16 mRNA表达水平明显低于P5和P15MSCs(P＜0.05).结论:胎儿股骨骨髓能培养出MSCs,其复制老化与Bmi-1的表达有关联,但其信号通路可能不通过p16INK4a-Rb介导.