干扰素β1a基因真核表达质粒的构建和表达

摘要

目的:构建干扰素β1a(IFN-β1a)的CHO表达体系,探讨人IFN-β1a在真核细胞中的表达效果.方法:采用全基因合成法获取重组人IFN-β1a基因,并通过点突变将IFN-β1a的17位半胱氨酸进行修饰,合成的基因经PCR扩增,连接入pSV2-dhfr质粒中,构建重组真核表达质粒pSV2-dhfr-IFN-β1a.将质粒转染至CHO-dhfr-细胞中,经MTX加压筛选,获得稳定生长的能够持续表达IFN-β1a的单克隆细胞株；提取细胞基因组DNA,进行PCR鉴定.收集细胞培养上清液,采用Wish细胞病变抑制法检测转染细胞中IFN-β1a的抗病毒活性.结果:重组真核表达质粒pSV2-dhfr-IFN-β 1a经PCR及双酶切鉴定证明构建正确；以转染细胞基因组DNA为模板,可扩增出IFN-β1a基因；转染后重组细胞表达的IFN-β1a具有抗病毒活性,达到3×105 IU·mL-1.结论:IFN-β1a基因真核表达质粒构建成功,并在CHO细胞中成功表达了具有较高生物学活性的IFN-β1a蛋白.