疏棉状嗜热丝孢菌热稳定蛋白酶的分离和纯化

摘要

蛋白酶是催化蛋白质水解的一类酶,广泛存在于各种生物体中.它们不仅对生物体内蛋白质的新陈代谢起调节作用,而且在酿造、发酵、食品、日用化工、纺织、制革、医药等工业和农业领域中具广泛应用价值.热稳定蛋白酶是目前研究和开发的新酶种,由于它在高温条件下的热稳定性和高活力,因此不仅具有重要应用前景,而且对理论上阐明酶的耐热机制具有重要意义.近几年,从嗜热微生物中分离热稳定蛋白酶引起人们的注意.国内外学者已从嗜热真菌中分离和纯化热稳定蛋白酶.关于从嗜热真菌中分离和纯化热稳定蛋白酶的研究报道很少.国外Ong ＆ Gaucher(1975)对嗜热真菌Malbranchea pulchella var.sulfurea的蛋白酶进行了分离纯化研究.国内Li D.C.et al(1997)(李多川等)研究了嗜热真菌疏棉状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)的热稳定蛋白酶的产生条件及特性.本文报道这种嗜热真菌稳定蛋白酶的分离和纯化.将分离到的疏棉状嗜热丝孢菌高产菌株在含酪蛋白的液体培养基中50℃条件下静止培养12d,培养滤液经硫酸铵分级沉淀(50％～90％饱和度)和Butyl-Sepharose疏水层析,得到了凝胶电泳均一的2种蛋白酶同功酶(同功酶I和同功酶Ⅱ).2种同功酶在Butyl-Sepharose上的层析行为有很大差异.同功酶I在硫酸铵饱和度由50％降至30％时被洗