苦瓜MAP30基因的克隆表达及对BGC-823细胞形态的影响

摘要

目的:克隆苦瓜蛋白MAP30基因,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,初步研究MAP30蛋白对BGC-823细胞的影响。方法:应用PCR技术从苦瓜基因组中扩增出MAP30基因片段,将其TA克隆和双酶切鉴定,再进行测序分析,并构建重组表达载体pET-28a-MAP30,转化到表达菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,用NTA-Ni2+树脂分离纯化所表达的MAP30融合蛋白,并经SDS-PAGE电泳鉴定;纯化的蛋白作用于BGC-823细胞后通过光镜和电镜进行形态学观察。结果:成功扩增出MAP30基因为861bp,与基因库中公布的DQ643967同源性为100%,与DQ643968和S79450的同源性为99%;成功构建pET-28a-MAP30原核表达重组质粒;通过NTA-Ni2+树脂分离纯化目的蛋白,获得原核表达的大小约为30000的MAP30融合蛋白,与预测一致;蛋白作用细胞后,细胞形态有明显变化。结论:成功构建pET-28a-MAP30表达载体并获得原核表达的MAP30融合蛋白;重组MAP30蛋白能引起BGC-823细胞明显的形态学变化。