苦瓜果实β-半乳糖苷酶基因的克隆、表达及亚细胞定位

摘要

根据已构建苦瓜果实均一化文库中获得的1个与β-Gal基因相关的EST序列,采用经3'RACE技术,克隆获得1个苦瓜β-Gal基因的cDNA序列McGAL,全长为2261 bp,开放阅读框2187bp,编码719个氨基酸.该基因在GenBank基因数据库的登录号为AFD54987.1.应用生物信息学软件对McGAL氨基酸序列分析表明,McGAL含有糖苷水解酶家族35的保守结构域G-G-P-[LIVM]-x-Q-x-E-N-E-[FY],C端不合凝集素结构域.二级结构显示,该酶含有α-螺旋(19.89％),伸展链(26.98％),β-转角(6.54％)和无规卷曲(46.59％).McGAL氨基酸序列与鹰嘴豆、苜蓿、绿豆、大豆、羽扇豆的氨基酸序列的同源性分别达到73％、73％、73％、72％和71％.亚细胞定位结果表明,McGAL定位在线粒体膜上.荧光定量结果表明,McGAL在果实绿熟期表达量最高并随之下降,该基因可能与果实成熟软化初期相关。