黄芪UGPase cDNA克隆、分析及其在大肠杆菌中的表达(英文)

摘要

在已报道的UGPase的植物cDNA序列基础上 ,从膜荚黄芪 (Astragalusmembranaceus (Fisch .)Bunge)毛状根中分离了此酶的cDNA。此cDNA全长为 1 831bp ,推测编码分子量为 5 1 .5kD、等电点为 6 .0 1的由 4 71个氨基酸残基组成的多肽。将此cDNA的开放阅读框载入质粒pET2 8(a) +并转入大肠杆菌 (Escherichiacoli)BL2 1。SDS_PAGE表明此酶已经在E .coli中获得大量表达 ,表达量约为总细菌蛋白的 4 0 %。酶活分析表明 ,转化菌中UGPase的活性比非转化菌高 0 .5 0～ 3.2 7倍 ,证明此cDNA可以在原核生物中获得表达。Northernblot表明UGPase在黄芪的根、茎、叶及毛状根中均有表达 ,在根及毛状根中表达量较高 。